产品货号：
ALH611
中文名称：
长片段快速PCR预混液
英文名称：
2×Fast-Long PCR MasterMix
产品规格：
1ml|5ml
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品包含Fast-Long DNA聚合酶、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。
本制品含红色示踪染料，PCR扩增产物不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；PCR扩增产物也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR扩增产物3'端带A头，纯化后可直接用零背景TA克隆试剂盒（货号ALH329、ALH331）克隆。
- 超快的扩增速度：延伸速度可以达到5～10秒/kb，最短半小时完成PCR。
- 突出的长片段扩增能力：可以扩增高达10kb的长片段（包括人类基因组此类的复杂模板）。
- 良好保真性：保真度是Taq DNA聚合酶的3倍以上。
- 强大扩增能力：产量高，对于一些有特殊结构的复杂模板和GC含量高模板有良好效果。
| 组分 | 1mL | 5mL |
| 2×Fast-Long PCR MasterMix | 1mL | 5mL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃，有效期2年。
- Fast-Long聚合酶扩增速度极快，短片段或者简单模板如质粒模板可以尝试5秒/kb延伸速度并采用较少循环数以进一步缩短PCR时间。长片段(≥3kb)或者复杂模板产量较低可以采用15～20秒/kb延伸速度或者采用较多循环数。
- 使用本制品扩增产量较低时可尝试采用较长的延伸时间(如20秒/kb）和循环数（如35个）可以提高PCR产物的产量。
- 对于GC含量很高的模板，短片段预变性和变性温度可以提高到98℃和/或适当延长变性时间。长片段为了避免DNA损伤不应该提高变性温度，应该适当延长预变性时间到5分钟，变性时间可以适当提高5～10秒。
- 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%～8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0～1.7M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）。
- 建议PCR体系：
成分 25μL反应体系 50μL反应体系 终浓度 2×Fast-Long PCR MasterMix 12.5μL 25μL 1× Forward Primer(10μM) 0.5μL 1μL 0.2μM Reverse Primer(10μM) 0.5μL 1μL 0.2μM 模板DNA 根据需要 根据需要 ddH2O 至25μL 至50μL - 参考模板用量(50μL体系)：质粒(0.1～10ng)、细菌基因组(10～100ng)、人类基因组(50～150ng)、cDNA(1～5μL)。
- 建议PCR循环条件：
步骤 温度 时间 循环数 初始变性 94℃ 2～3min 1 变性 94℃ 10sec 25～35 退火 55℃ 10～15sec 延伸 72℃ 10sec/kb 最后延伸 72℃ 1～5min 1 4～8℃ Hold -
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